PCR儀溫度校準說(shuō)明
瀏覽次數：2511發(fā)布日期：2020-09-22
PCR儀溫度校準說(shuō)明
PCR儀溫度校準是一種用來(lái)放大特定的DNA時(shí)間段的儀器，主要采用的是半導體熱泵制冷技術(shù)以及膜加熱技術(shù)，保證了升溫速度的穩定和快速。
PCR技術(shù)能快速地在體外試管內擴增目標基因或DNA時(shí)間段,是科研人員獲得目標DN時(shí)間片段的常用技術(shù),在生物醫學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的應用。PCR儀樣品塊的溫度精度和均勻性是影響PCR反應效果的重要因素。為了測量樣品塊的溫度均勻性及其它溫度參數,要求測量工具必須具有多個(gè)測量通道,且具有很佳的測量精度、響應速度、通道一致性和通道同步性。
關(guān)于PCR儀溫度校準的詳細說(shuō)明：
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溫度準確性是PCR儀重要的性能指標，如溫度準確性低可直接造成非特異性擴增，甚錯誤的擴增結果，造成假陽(yáng)性和假陰性。
市場(chǎng)上各家廠(chǎng)商考核基因擴增儀（PCR儀）性能的主要指標，一般廠(chǎng)家的企業(yè)指標為±0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實(shí)現的溫度準確度為±0.3℃。故需對PCR儀控溫準確度進(jìn)行測試。
校準實(shí)驗平均溫度的計算公式為：I—參加檢測的溫度探頭序號；n—參加檢測的溫度探頭的數量
?。ǘ貓?chǎng)均勻性
由于PCR儀加熱器加熱不均勻，導致PCR儀模塊上各孔存在一定溫差。造成試驗結果偏差。一般PCR儀邊緣點(diǎn)的溫度低于中間區域，所以均勻性為PCR儀重要的性能指標。一般廠(chǎng)家的企業(yè)指標規定均勻性為±0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實(shí)現的溫度均勻度為±0.3℃。
校準實(shí)驗時(shí)，通過(guò)選取孔板中16個(gè)特殊反應位置來(lái)測量溫度，并得出孔板的溫度均勻性。均勻性為各個(gè)探頭在同一時(shí)刻大溫度與小溫度的差值。均勻度計算公式為：tmax-tmin（tmax =大溫度；tmin =小溫度）
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PCR擴增產(chǎn)物數量的多少決定了PCR的效率。為了在短時(shí)間內獲得盡可能多的產(chǎn)物，需要儀器在升降溫段具有按照預設升降溫速率快速升溫和降溫的能力（大升溫速率達15~20℃）。一個(gè)完整的PCR過(guò)程，是由若干個(gè)升溫→恒溫→降溫循環(huán)構成的。因為“變性”，“退火”和“延伸”3個(gè)階段是必須要保證的。因此，只有使升降溫的過(guò)程盡可能地迅速，才能縮短每個(gè)PCR循環(huán)以及整個(gè)PCR 過(guò)程所需時(shí)間。一般廠(chǎng)家的企業(yè)指標規定升溫速率為±3℃/sec。
PCR儀溫度校準實(shí)驗中，升溫速率為溫度從40℃到90℃的時(shí)間；降溫速率為溫度從70℃到35℃的時(shí)間。
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